Qubit RNA IQ Assay Kit 的檢測原理主要基于熒光染料與 RNA 的特異性結(jié)合以及對熒光信號的檢測,具體如下:
染料與 RNA 特異性結(jié)合:試劑盒中的熒光染料能夠特異性地結(jié)合到 RNA 分子上。這種染料具有特殊的結(jié)構(gòu)和性質(zhì),它可以插入到 RNA 的雙鏈區(qū)域或與 RNA 的特定結(jié)構(gòu)域相互作用,而且結(jié)合的程度與 RNA 的量成正比。
熒光信號產(chǎn)生與檢測:當熒光染料結(jié)合到 RNA 上后,在特定波長的激發(fā)光照射下,染料會被激發(fā)并發(fā)出熒光。Qubit 儀器能夠精確地檢測到這種熒光信號的強度。由于熒光信號強度與結(jié)合的染料量成正比,而染料量又與 RNA 的量成正比,所以通過檢測熒光信號強度就可以準確地測定 RNA 的濃度。
RNA 質(zhì)量評估:該試劑盒不僅可以檢測 RNA 濃度,還能評估 RNA 的質(zhì)量。它是通過檢測不同大小 RNA 片段所產(chǎn)生的熒光信號分布來實現(xiàn)的。例如,完整的核糖體 RNA(rRNA)包括 28S rRNA 和 18S rRNA 等,它們的大小不同。在正常情況下,細胞內(nèi)的 rRNA 含量相對穩(wěn)定,且 28S rRNA 與 18S rRNA 的比值也較為固定。當 RNA 發(fā)生降解時,rRNA 會斷裂成較小的片段,導(dǎo)致 28S rRNA 與 18S rRNA 的比值發(fā)生變化,以及 RNA 完整性指數(shù)(RIN)改變。Qubit RNA IQ Assay Kit 通過分析熒光信號在不同大小片段上的分布情況,計算出 RIN 值和 28S/18S 比值等參數(shù),從而評估 RNA 的質(zhì)量和完整性。